1.目的 測(cè)定糧食、油料中粗蛋白的含量 2.范圍 含氮量0.02%-95%之間的糧食、油料 3.定義 無 4.職責(zé) 檢驗(yàn)員負(fù)責(zé)檢驗(yàn)工作的執(zhí)行 5.作業(yè)辦法 5.1 ST-08C定氮儀測(cè)定法 5.1.1工作原理 ST-08C定氮儀是由消化爐與定氮儀蒸餾器組成。將試樣置入消化管插入井式加熱爐內(nèi)加熱取得最佳的熱效應(yīng)，在消化之前置入催化劑進(jìn)一步加速消化煮解，大大縮短消化時(shí)間。消化管內(nèi)溢出的SO2等有害氣體，通過消化管上的排污管經(jīng)抽氣三通由下水道帶入下水道，有效的抑制了有害氣體的外溢，試樣經(jīng)40分鐘左右消化煮解，即可完全消化盡。 5.1.2技術(shù)參數(shù) 5.1.2.1測(cè)定樣品量：固體<5g/個(gè)，液體<15ml/個(gè) 5.1.2.2工作電壓：220V，50HZ 5.1.2.3電耗：蒸餾器800W、消化爐（四孔1200W）(八孔2400W) 5.1.3操作方法 5.1.3.1試劑準(zhǔn)備 5.1.3.1.1濃硫酸混合液 在100mL水中緩緩加入濃硫酸200mL，冷卻后加入30%過氧化氫300mL，混合均勻。 5.1.3.1.2混合催化劑 硫酸銅10g、硫酸鉀100g、硒粉0.2g，在研缽中研細(xì)過孔徑0.45mm（40目篩），混勻備用。 5.1.3.1.3 混合指示劑 2份甲基紅乙醇溶液（稱取0.1g甲基紅置于研缽中加入少許95%乙醇，研磨溶解后，加入75mL95%乙醇）與1份次甲基藍(lán)乙醇溶液（0.1g次甲基藍(lán)溶于80mL95%乙醇中）臨用時(shí)混合?；蚴褂糜?.2%甲基紅乙醇溶液1份和0.2%溴甲酚綠乙醇溶液5份配置的混合指示劑，終點(diǎn)為灰紅色。 5.1.3.1.4 20g/L硼酸溶液 稱取20g硼酸溶解在1000mL水中。 5.1.3.1.5 400g/L氫氧化鈉溶液 稱取40g氫氧化鈉溶于100mL水中。 5.1.3.1.6 0.01mol/L鹽酸溶液 5.1.3.1.6.1配置 先配置0.1mol/L鹽酸，量取9mL濃鹽酸，加水定容至1000mL。再配置0.01mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，量取已配置的0.1mol/L鹽酸100ml加水定容至1000mL。 5.1.3.1.6.2 0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的滴定 稱取0.2g于270℃-300℃灼燒至恒重的工作基準(zhǔn)試劑無水碳酸鈉，溶于50mL水中，加10滴溴甲酚綠-甲基紅混合指示液，用配置好的鹽酸溶液滴定至溶液由綠色變?yōu)榘导t色，煮沸2min，冷卻后繼續(xù)滴定至溶液再呈暗紅色。同時(shí)做空白試驗(yàn)。 5.1.3.1.6.3 計(jì)算 C(HCL)= 1000×m(V1-V2)×52.994 式中 C(HCL)——鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的物質(zhì)的量濃度，mol/L； m——無水碳酸鈉的質(zhì)量，g V1——鹽酸溶液的用量，mL V2——空白試驗(yàn)鹽酸溶液的用量，m； M——無水碳酸鈉的摩爾質(zhì)量，其值為M（1/2Na2CO3)=52.994g/mol。 5.1.3.2樣品消化 稱取經(jīng)粉碎通過40-60目的樣品0.5-1.0g用蠟光紙卷著倒入已洗滌烘干的消化管中加催化劑5g左右和10mL左右硫酸。將消化管分別放入消化架各個(gè)孔內(nèi)，然后置于消化爐上，然后開啟抽氣三通接上自來水龍頭，使抽氣三通處于吸氣狀態(tài)，接通電源，在加熱初始階段注意防止樣品飛濺。消化爐溫度起先控制在200度左右，20分鐘后可以再設(shè)定至450度以上。 消化終點(diǎn)是以消化液的顏色來判定的，當(dāng)消化液呈淺藍(lán)綠色的透明狀時(shí)，再繼續(xù)加熱沸騰10分鐘，然后結(jié)束消化過程。 5.1.3.3 蒸餾 5.1.3.3.1蒸餾器中，堿液及蒸餾水采用電磁泵加入，NaOH、H2O注入接口用橡膠管套入后分別置入自備的容器中，加液時(shí)按面板上相應(yīng)開關(guān)，液體由泵吸入消化管內(nèi)，注入毫升數(shù)視標(biāo)尺所注位置而定。（一般堿液加量是消化時(shí)硫酸用量的5倍以上，加蒸餾水量15毫升左右）。 5.1.3.3.2 打開電源，打開自來水龍頭，接冷卻水，自來水龍頭不必開過大，出水口有水流出即可，用排水管子上的夾子夾緊排水管子。打開面板上右邊蒸氣開關(guān)，手柄往上推為開蒸氣，同時(shí)把左邊的進(jìn)水開關(guān)手柄往上推為開，待電流表指針指在2A-3A時(shí)馬上把左邊進(jìn)水開關(guān)手柄往下壓，壓到底壓不下為關(guān)（如果水進(jìn)入側(cè)面蒸發(fā)爐慢，電流表長(zhǎng)時(shí)間沒反應(yīng)，用吸耳球往正面的細(xì)長(zhǎng)管內(nèi)吹幾下，以排除管內(nèi)空氣），待蒸氣管噴出氣后又上推打開左進(jìn)水開關(guān)供水，1分鐘左右電流穩(wěn)定在3.5A-6A左右后，關(guān)閉右蒸氣開關(guān)，手柄往下壓到底。因?yàn)榧t色進(jìn)水開關(guān)是控制機(jī)器內(nèi)部產(chǎn)生蒸氣的水源開關(guān)，從側(cè)面的有機(jī)玻璃窗口可以看到蒸發(fā)爐水位的高低，防止水位過高，因?yàn)橐婚_始水沒有沸騰，水不斷進(jìn)入，容易使電流過大而燒壞保險(xiǎn)絲。蒸氣開關(guān)是起通斷蒸氣作用，也是水源進(jìn)入蒸發(fā)爐和排除蒸發(fā)爐水的排水器件。（如果蒸氣出來后電流不大，開關(guān)一下紅色蒸氣開關(guān)會(huì)正常。 5.1.3.3.3 在250mL三角接受瓶中加入50mL2%H3BO3和2-3滴混合指示劑，蒸餾時(shí)間設(shè)定6-8分鐘，并使接受瓶托架盤往上移，使滴定管浸沒在液體中，然后按時(shí)控開關(guān)。 5.1.3.3.4 向上扳動(dòng)側(cè)面紅球手柄把消化管固定在左邊托架上，然后按面板上開關(guān)分別加入H2O、NaOH液體，然后上推蒸氣開關(guān)，向試管內(nèi)注入蒸氣，進(jìn)行蒸餾樣品，在接受瓶?jī)?nèi)接受液達(dá)150mL左右時(shí)移下接受瓶，用蒸餾水沖洗滴管口繼續(xù)蒸餾半分鐘，然后取下接受瓶，待滴定用，關(guān)蒸氣開關(guān)，第二個(gè)樣品只要放上后，加好液，上推蒸氣開關(guān)即可，不要關(guān)電源。 5.1.3.4滴定 用0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定接收瓶?jī)?nèi)的溶液，滴定溶液由綠色變?yōu)榈仙珪r(shí)為止，記下消耗鹽酸的毫升數(shù)，按下式計(jì)算蛋白含量： 蛋白含量（%）=（V-V0）×N×0.014×A×100/W 式中：V——消耗的鹽酸的毫升數(shù) V0——空白試驗(yàn)時(shí)消耗鹽酸毫升數(shù) N——鹽酸的當(dāng)量濃度 0.014——1mL鹽酸的克當(dāng)量數(shù) A——固定系數(shù)（6.25、5.7、5.3） W——試樣重量,g 5.1.3.5關(guān)機(jī) 關(guān)電源、關(guān)水龍頭、打開排水夾子，兩紅球開關(guān)上推，取下消化管，擦干機(jī)器。 5.1.4注意事項(xiàng) 5.1.4.1 消化時(shí)如氣體外逸，加大自來水壓力。小花圈每次試驗(yàn)結(jié)束后清洗一遍延長(zhǎng)使用壽命。堿泵每次工作完后把氫氧化鈉溶液外接皮管移入蒸餾水瓶?jī)?nèi)，前面套好消化管抽洗幾次，防止堿濃度過高，殘留在堿泵內(nèi)而影響壽命年工也可防止單向閥閥芯粘連。待下次使用時(shí)，在蒸餾時(shí)須排出100mLNaOH，以防止第一個(gè)樣品NaOH濃度不夠。過一段時(shí)間用稀酸清洗一下蒸發(fā)爐并用清水洗幾次，保養(yǎng)電極。 5.1.4.2 如果操作不當(dāng)，15A保險(xiǎn)絲燒斷后，請(qǐng)拔去電源插頭，換上新的后，關(guān)水龍頭，打開排水夾子排盡蒸發(fā)爐內(nèi)的水，按照開機(jī)步驟重新開機(jī)操作。 5.2 凱式定氮測(cè)定法 5.2.1儀器和用具 5.2.1.1 凱氏燒瓶：50ml； 5.2.1.2 圓底燒瓶：100ml； 5.2.1.3 萬用電爐； 5.2.1.4 錐形燒瓶：100ml； 5.2.1.5 微量滴定管：5ml、刻度0.01ml； 5.2.1.6 容量瓶：50ml； 5.2.1.7 移液管：5ml； 5.2.1.8 量筒：10ml； 5.2.1.9 洗耳球； 5.2.2 試劑 同上 5.2.3 操作方法 5.2.3.1 消化 稱取經(jīng)粉碎通過40-60目的樣品0.2～0.3g（W，精確到0.0001g），用蠟光紙卷著倒入洗凈烘干的50ml凱氏燒瓶中，加混合指示劑1g,同時(shí)加入硫酸-過氧化氫-水混合液3～5ml，稍加振搖，斜置于電爐上，在通風(fēng)櫥內(nèi)加熱進(jìn)行消化。開始時(shí)用低溫加熱，勿使瓶中泡沫超過瓶肚的三分之二，待泡沫減少和煙霧變白后再增加溫度保持微沸。消化到溶液呈淺藍(lán)綠色的透明狀時(shí)，再繼續(xù)加熱沸騰10min，取出待消化液冷卻至室溫后，加水10～20ml，再待溶液溫度降到室溫后，干凈地轉(zhuǎn)入50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻備用。同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)。 5.2.3.2 蒸餾 在燒瓶?jī)?nèi)加水400ml和少量沸石，加5滴混合指示劑，加幾滴酸液使水呈紫紅色，連接蒸餾裝置，并檢查有無漏氣處。 量取30ml1%硼酸溶液注入錐形瓶?jī)?nèi)，加混合指示劑2滴，使冷凝管下端插入液面下1cm處。量取稀釋的消化液5ml，由漏斗注入蒸餾瓶?jī)?nèi)，再加水10ml，沖洗加液漏斗。量取40%氫氧化鈉溶液1ml，提起活塞注入蒸餾瓶?jī)?nèi)，立即用水2～5ml沖洗漏斗，旋緊活塞。這時(shí)蒸餾瓶?jī)?nèi)溶液總體積不要超過其容量的一半。 打開簧夾，關(guān)閉活塞，加熱燒瓶，待蒸餾瓶?jī)?nèi)溶液開始沸騰時(shí)開始計(jì)時(shí)，經(jīng)2min降低錐形瓶，使冷凝管下端露出液面，再蒸餾1min后，用水沖洗管下端。 蒸餾結(jié)束后，掐緊簧夾，斷絕蒸氣，使蒸餾瓶?jī)?nèi)溶液全部吸入回流管中，放松簧夾，從漏斗加入蒸餾水40～50ml，再通蒸氣加熱和回流，將蒸餾瓶洗滌一次備用。 5.2.3.3 滴定 用0.01 mol/L鹽酸溶液滴定錐形瓶?jī)?nèi)的吸收液，滴定溶液出現(xiàn)淺紫紅色為止。同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)。 5.2.4 結(jié)果計(jì)算 粗蛋白質(zhì)的干基含量按下列公式計(jì)算： 粗蛋白質(zhì)（干基%）= （V1-V0）×N×14×P×50v ×10000W(100-M) 式中：V——蒸餾時(shí)取用稀釋的消化液體積，ml； V1——實(shí)驗(yàn)用去的鹽酸溶液體積，ml； 1 V0——空白試驗(yàn)用去的鹽酸溶液體積，ml； N——鹽酸溶液的當(dāng)量濃度，N； 14——每毫克當(dāng)量鹽酸相當(dāng)于氮的毫克數(shù)； P——蛋白質(zhì)換算系數(shù)（小麥5.7，其他谷物及豆類6.25）； W——試樣重量，mg； M——試樣水分百分率，%。 5.2.5 注意事項(xiàng) 5.2.5.1 消化過程中若硫酸損失過多，可酌情補(bǔ)加硫酸，勿使消化瓶?jī)?nèi)干涸。 5.2.5.2 加入蒸餾瓶?jī)?nèi)的堿液必須過量。 5.2.5.3 消化液加水稀釋后，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行蒸餾。
